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第一章　绪论1

第一节　组织化学的研究内容和原理1

一、组织化学的兴起与发展1

二、组织化学的研究内容2

三、组织化学技术的原理3

第二节　组织化学方法的基本要求和注意事项3

一、基本要求4

二、注意事项4

第二章　组织制备5

第一节　取材5

一、注意事项5

二、样品大小5

第二节　固定5

一、固定的目的6

二、固定的对象7

三、固定剂的性质7

四、固定的方法7

五、固定的注意事项8

六、常用固定剂9

第三节　洗涤、脱水和透明18

一、洗涤18

二、脱水19

三、透明19

第四节　包埋20

一、石蜡包埋法20

二、电镜包埋剂21

第五节　切片23

一、石蜡切片法23

二、冰冻切片法24

三、其他切片法26

第六节　切片贴附和封固26

一、贴附和贴附剂26

二、封固和封固剂27

第七节　缓冲液28

一、缓冲液的组成及应用28

二、摩尔（克分子）溶液29

第三章　糖类及其衍生物的组织化学31

第一节　分类31

一、糖类化学31

二、糖类的组织化学分类32

第二节　糖类的组织化学方法35

一、糖原的显示法35

二、糖共轭物（黏蛋白类）的显示法39

三、纤维素及类纤维素的显示法43

四、淀粉样物质的显示法45

第四章　核酸和核蛋白组织化学47

第一节　显示DNA的方法47

一、Feulgen反应47

二、改良Feulgen反应49

第二节　对比显示DNA和RNA的方法49

一、甲基绿-派洛宁法49

二、吖啶橙反应50

第三节　核酸的消化与提取51

一、DNA的消化51

二、RNA的消化52

三、过氯酸提出法53

四、三氯乙酸提出法53

第四节　显示核蛋白的方法53

一、氨银法染组氨酸53

二、肝素-阿尔新蓝反应54

第五节　核仁组成区嗜银蛋白染色55

一、Ag-NOR经典染色法55

二、李氏Ag-NOR改良法56

第五章　脂类组织化学57

第一节　脂类组织化学概述57

一、分类57

二、固定57

三、常用组化显示法57

第二节　物理方法显示脂类58

一、苏丹黑法显示中性脂肪58

二、溴-苏丹黑法显示脂类59

三、油红O显示中性脂肪60

四、偏振光显微镜检测法61

第三节　化学方法显示脂类61

一、四氧化锇显示不饱和脂类61

二、硫酸尼罗蓝显示中性及酸性脂类62

三、过氯酸-萘醌（PAN）法显示胆固醇及胆固醇酯63

四、酸性苏木红显示磷脂法64

第六章　蛋白质组织化学67

第一节　蛋白质的组化显示原理67

第二节　蛋白质的组织化学显示方法68

一、茚三酮-Schiff法显示氨基酸68

二、米伦反应显示酪氨酸69

三、坂口反应显示精氨酸69

四、DDD反应显示硫氢基70

五、汞-橘黄法显示巯基71

六、过甲酸-阿尔新蓝显示二硫键72

第七章　酶类组织化学74

第一节　酶及其组织化学的基本理论74

一、生物体内酶的分类74

二、酶组织化学的意义75

三、酶的组化反应75

四、影响酶组化显示效果的因素78

第二节　几种常见酶的组织化学79

一、碱性磷酸酶79

二、酸性磷酸酶81

三、葡萄糖-6-磷酸酶83

四、硫胺素焦磷酸酶84

五、非特异性酯酶85

六、琥珀酸脱氢酶86

七、乳酸脱氢酶88

八、3β-羟甾体脱氢酶89

九、三磷酸腺苷酶90

十、明胶薄膜法显示顶体酶92

第八章　免疫组织化学的基本理论94

第一节　免疫学基础94

一、抗原94

二、抗体95

第二节　常用标记物及其检测98

一、荧光染料98

二、酶99

三、生物素103

四、胶体金104

第三节　基本条件110

一、组织抗原的保存与暴露110

二、特异性抗体115

三、免疫组织化学常用试剂118

第九章　常用的免疫组织化学方法123

第一节　基本原理123

一、直接法123

二、间接法124

三、未标记抗体酶法124

四、标记抗原法126

第二节　免疫荧光法126

一、原理126

二、染色方法127

三、对照试验128

四、结果的观察与记录129

五、非特异性荧光的消除129

第三节　免疫酶法131

一、原理131

二、酶标抗体法131

三、PAP法132

四、EnVision法135

第四节　抗生物素蛋白-生物素法135

一、原理136

二、ABC法136

三、SP法139

第五节　蛋白A法140

一、蛋白A的性质及应用140

二、染色方法142

第六节　免疫金法与免疫金银法142

一、免疫金法143

二、免疫金银法144

第十章　免疫组织化学的特异性与敏感性148

第一节　特异性与特异性染色148

一、特异性148

二、特异性染色与非特异性染色148

第二节　对照试验149

一、阳性对照149

二、阴性对照150

第三节　提高免疫组织化学敏感性的方法152

一、增强特异性染色152

二、背景染色的来源及消除155

第十一章　免疫组织化学双重染色技术158

第一节　连续切片双重染色法158

第二节　免疫荧光双重染色法158

一、直接法159

二、间接法159

第三节　免疫酶双重染色法160

一、基本考虑160

二、抗体洗脱161

三、第一抗体来自不同种属动物的双重染色164

四、第一抗体来自同种属动物的双重染色165

五、免疫荧光和免疫酶双重染色法的比较168

第四节　免疫酶-免疫荧光双重染色法169

第五节　免疫酶-免疫金（银）双重染色法169

第十二章　凝集素组织化学171

第一节　凝集素的特性与应用171

一、组织中糖的结构171

二、凝集素的特性172

三、凝集素的应用175

第二节　凝集素组织化学方法175

一、基本原理与条件176

二、直接法177

三、抗体法178

四、生物素法180

五、糖-凝集素-糖夹层法181

六、电镜方法182

七、对照试验184

第三节　凝集素的标记与抗体制备185

一、凝集素和糖蛋白的标记185

二、凝集素抗体的制备186

第十三章　原位杂交组织化学188

第一节　原位杂交组织化学的基本原理188

第二节　探针制备189

一、探针的种类及选择190

二、探针标记的原理和方法192

第三节　原位杂交组织化学的程序193

一、基本流程193

二、使用DNA探针检测石蜡切片中mRNA193

三、使用地高辛标记的cRNA探针检测石蜡切片中mRNA204

第四节　影响原位杂交的因素207

一、探针的浓度207

二、杂交温度207

三、杂交反应的时间208

四、杂交液208

五、严格度209

第五节　对照试验209

一、组织对照209

二、探针对照210

三、杂交反应对照210

四、检测系统对照211

第十四章　原位PCR技术212

第一节　原位PCR技术的基本原理212

第二节　原位PCR技术的基本类型213

一、直接法原位PCR技术213

二、间接法原位PCR技术213

三、原位反转录PCR213

第三节　原位PCR技术的程序214

一、标本的制备214

二、原位聚合酶链反应215

三、原位检测215

四、直接法原位PCR技术的操作步骤215

五、间接法原位PCR技术的操作步骤216

六、对照试验216

第四节　原位PCR技术的应用217

一、用于外源性基因的检测217

二、用于内源性基因的检测217

第十五章　电镜细胞化学技术218

第一节　电镜酶细胞化学技术218

一、电镜酶细胞化学程序218

二、电镜酶细胞化学举例223

三、细胞器的电镜酶细胞化学227

第二节　电镜免疫细胞化学技术232

一、免疫电镜的技术要求232

二、免疫酶电镜技术237

三、免疫金电镜技术240

四、免疫电镜双重染色技术242

五、扫描免疫电镜技术246

六、冷冻蚀刻免疫电镜技术249

第十六章　组织化学和免疫组织化学的定量测定252

第一节　显微分光光度术252

一、显微分光光度计的工作原理252

二、显微分光光度术253

三、显微分光光度术的应用253

第二节　图像分析术254

一、图像分析仪的基本原理255

二、图像分析仪的工作程序255

三、图像分析系统在生物医学研究中的应用257

第三节　流式细胞术257

一、流式细胞仪的主要构成和原理257

二、流式细胞术的样品制备258

三、流式细胞术的应用262

第四节　激光扫描共焦显微镜术263

一、激光扫描共焦显微镜术的基本原理和特点264

二、激光扫描共焦显微镜的功能265

三、几种荧光染料的染色方法267

主要参考文献270

附录274

附录1　常用缓冲液的配制274

附录2　免疫组织化学常用抗体标记谱282