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目录1

第一章 生化实验基本技术1

第一节　分光光度法1

一、紫外及可见分光光度法1

二、荧光光谱分析法5

第二节　层析法8

一、纸层析法8

Ⅰ．紫外吸收法测定核酸含量 （111

二、薄层层析法12

三、离子交换层析法16

四、凝胶层析法22

第三节 电泳法26

一、电泳方法的分类27

二、电泳技术的应用28

第四节　离心分离法31

一、原理与计算31

二、制备离心技术34

三、分析超离心37

本章参考文献37

第二章 蛋白质的分子组成、结构及理化性质分析39

第一节 概述39

二、蛋白质的分离和纯化39

一、蛋白质分子的基本概念39

三、蛋白质的定量40

四、蛋白质纯度的鉴定40

五、蛋白质分子的序列分析41

第二节　实验项目42

实验一蛋白质的定量测定42

Ⅰ．Kjeldahl定氮法42

Ⅱ．Lowry酚试剂法44

Ⅲ．紫外光谱吸收法46

Ⅳ．考马斯亮蓝染色法48

实验二 生物体液和组织蛋白质的分离和鉴定50

Ⅰ．血清IgG的分离纯化（离子交换层析法）50

Ⅱ．细胞色素c的制备及鉴定54

Ⅰ．醋酸纤维薄膜电泳60

实验三 血清蛋白质的电泳分离60

Ⅱ．聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳63

实验四 蛋白质理化性质分析69

Ⅰ．等电聚焦电泳法测定蛋白质等电点69

Ⅱ．SDS-PAGE测定蛋白质相对分子质量71

实验五 蛋白质的分子筛层析分离及相对分子质量测定77

Ⅰ．血红蛋白、DNP-鱼精蛋白混合物的分离（分子筛层析法）77

Ⅱ．分子筛层析测定蛋白质相对分子质量83

实验六 蛋白质分子组成及末端氨基酸分析87

Ⅰ．DNS法分析蛋白质氨基酸组分87

Ⅱ．蛋白质及多肽的N-末端氨基酸分析（FDNB法）90

Ⅲ．蛋白质及多肽的C-末端氨基酸分析（羧肽酶法）96

实验七 肽的N-末端测定及其顺序分析（DABITC/PITC双偶合法）98

实验八 固定化蛋白质的免疫生化鉴定（Western印迹）101

本章参考文献103

一、核酸的分子组成与结构104

第三章　核酸的分子组成及理化性质分析104

第一节 概述104

二、核酸的理化性质105

三、核酸的制备和含量测定106

第二节　实验项目107

实验九 动物肝脏RNA的制备（苯酚法）107

实验十 小牛胸腺DNA的制备（浓盐法）109

实验十一核酸的含量测定111

Ⅱ．定磷法测定核酸含量112

Ⅲ．地衣酚法测定RNA含量114

Ⅳ．二苯胺显色法测定DNA含量115

实验十二 电泳法分离RNA和DNA117

Ⅰ．琼脂糖凝胶电泳分离DNA117

Ⅱ．聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）分离RNA120

实验十三 DNA碱基成分分析及含量测定123

本章参考文献125

第四章　酶作用及酶反应动力学分析126

第一节 概述126

一、酶反应动力学分析126

二、酶的抑制作用动力学128

三、影响酶反应速率的其他因素130

四、酶试验131

第二节 实验项目133

实验十四 蔗糖酶与淀粉酶作用的专一性133

实验十五 胰蛋白酶的亲和层析法纯化136

实验十六 酸性磷酸酶KM及Vmax值测定143

附一、0.1N碘溶液的配制及标定146

二、0.1N硫代硫酸钠溶液的配制及标定147

实验十七 磷酸盐及氟化钠对酸性磷酸酶的抑制作用148

实验十八　乳酸脱氢酶同工酶分析151

本章参考文献152

三、研究方法153

二、研究目的、材料153

第一节　概述153

一、物质代谢定义153

第五章 物质代谢及其激素调节153

四、实验安排154

第二节 实验项目155

实验十九　胰岛素及肾上腺素对血糖浓度的影响155

附　Nelson-Somogyi法测定血糖浓度155

实验二十　饱食、饥饿及激素对肝糖元含量的影响158

实验二十一 三羧酸循环中间产物对酵母耗氧率的影响（Warburg氏呼吸仪示教）160

附　Warburg氏呼吸仪的构造和使用161

实验二十二　脂类的薄层层析165

实验二十三 酮体的生成与利用167

实验二十四 血清低密度脂蛋白与极低密度脂蛋白的比浊测定170

附 标准曲线的制作170

实验二十五 血清脂蛋白的醋酸纤维薄膜电泳172

实验二十六 转氨基作用175

实验二十七 血清谷丙转氨酶活性的测定（赖氏法）177

实验二十八 生物氧化与电子传递180

本章参考文献181

第六章 分子生物学基本实验技术182

第一节　概述182

一、核酸是遗传物质182

二、基因与基因组182

三、DNA复制、损伤与修复183

四、基因表达和遗传密码185

五、基因表达的调控187

六、分子生物学实验技术相关知识187

第二节 实验项目188

实验二十九　质粒DNA的提取188

实验三十 质粒DNA酶切及琼脂糖凝胶电泳分离鉴定191

实验三十一 质粒DNA的分子杂交194

实验三十二　mRNA的提取与纯化198

实验三十三 血液标本中DNA的提取201

实验三十四 脉冲电场凝胶电泳203

实验三十五　RNA分析——Northern杂交205

实验三十六 聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA209

实验三十七 反转录聚合酶链反应（RT-PCR）212

实验三十八　cDNA文库的构建214

实验三十九　PCR-RFLP法测定CYP2C19ml等位基因220

实验四十 等位基因特异扩增法分析基因中单碱基突变222

实验四十一 利用PCR差异显示mRNA225

本章参考文献229

附录230

一、硫酸铵饱和度计算表230

二、缓冲溶液的配制232

三、常见蛋白质相对分子质量参考值243

四、常见蛋白质等电点参考值245

五、实验误差246

六、实验报告248

七、实验注意事项及应急处理249