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第一章 生物化学实验的基本要求1

第一节 实验的准确性1

一、有效数字1

二、误差2

三、误差的表示方法和计算3

四、与质量控制有关的几个基本概念4

五、统计学的一些基本概念和计算公式4

二、实验报告10

一、实验记录10

第二节 实验记录及报告10

第三节 实验样品的制备11

一、动物的脏器11

二、微生物11

三、细胞12

第四节 玻璃仪器的洗涤及各种洗液的配制法12

一、初用玻璃仪器的清洗12

二、使用过的玻璃仪器的清洗12

三、洗涤液的种类和配制方法13

第五节 试剂的配制及一些常用数据表14

第二章 常见的实验方法及基本原理16

第一节 离心技术16

一、离心沉降速率影响因素16

二、沉降系数17

三、离心设备19

四、制备超离心法19

一、薄层层析22

第二节 层析技术22

二、聚酰胺薄膜层析23

三、凝胶层析23

四、离子交换层析23

五、亲和层析25

六、气相色谱26

七、高效液相色谱27

第三节 电泳技术28

一、影响电泳的主要因素28

二、常用电泳支持介质29

三、聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳30

四、连续密度梯度电泳32

五、SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳32

六、等电聚焦电泳32

七、双向电泳33

八、毛细管电泳34

九、电泳新技术35

一、基本原理36

第四节 分光光度法36

二、比色法37

三、分光光度法38

四、浊度法39

第五节 基因多态性及其检测方法39

一、基因多态性39

二、基因多态性的检测方法40

第三章 普通实验42

实验一 Folin－酚法测定蛋白质含量42

实验二 肌糖原的酵解作用43

实验三 影响酶活性的因素46

实验四 碱性磷酸酶Km值测定49

实验五 乳酸脱氢酶及辅酶Ⅰ琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制52

实验六 酮体的生成与利用55

实验七 血清丙氨酸氨基转移酶测定56

实验八 分光光度法测定血红蛋白含量及血糖59

实验九 蛋白质的变性与沉淀67

实验十 血清蛋白质的醋酸纤维薄膜电泳69

实验一 质粒DNA的提取及电泳鉴定72

第四章 综合实验72

实验二 鸡卵类粘蛋白的制备及活力的测定75

实验三 动物肝脏DNA的提取与二苯胺测定82

实验四 酵母RNA的提取及醋酸纤维薄膜电泳分离核苷酸85

第五章 设计实验90

第六章 选择实验91

实验一 蛋白质的两性性质及等电点的测定91

实验二 枯草杆菌碱性磷酸酶的制备及酶活性的测定93

实验三 单核苷酸的离子交换柱层析分离96

实验四 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白印迹99

第七章 开拓性实验106

实验一 从动物毛发中提取DNA进行RAPD扩增106

实验二 DNA指纹图谱分析108

实验三 小鼠肾脏组织的双向电泳112

实验四 随机扩增多态DNA118

第八章 方法学评价实验122

实验一 线性范围试验122

实验二 批内重复性试验124

实验三 回收试验127

实验四 干扰试验129

实验五 方法比较试验130

实验六 检测能力测定133

第九章 实验室安全知识及防护知识136

第十章 常用生化仪器的使用方法139

第一节 称量仪器139

第二节 分光光度计142

第三节 离心机145

第四节 干燥箱和恒温箱146

第五节 电热恒温水浴147

第六节 自动部分收集器148

第七节 核酸蛋白检测仪149

第八节 酸度计149

第九节 移液器151

第十一章 缓冲溶液152

第一节 缓冲理论152

第二节 常用缓冲液配制方法152

第一节 核酸染色156

第十二章 电泳染色方法156

第二节 蛋白质染色157

第三节 糖蛋白染色158

第四节 脂蛋白染色158

第五节 同工酶染色159

第十三章 核酸实验方法及相关数据164

第一节 核酸含量的测定164

第二节 常用的核酸换算公式及某些核酸的性质165

第三节 核酸的纯化与浓缩167

一、离子交换层析数据及参数170

第十四章 常用数据170

第一节 常用层析介质数据170

二、聚丙烯酰胺凝胶的技术数据172

三、琼脂糖凝胶的技术参数172

四、凝胶过滤层析介质的技术参数172

五、Sephadex G型交联葡聚糖凝胶的数据177

六、Sephadex G型交联葡聚糖凝胶溶胀所需时间178

七、琼脂糖凝胶的数据178

八、Superose的数据179

九、琼脂糖凝胶Bio-Gel A型的数据179

十、Bio-Gel P型凝胶的数据180

十一、交联聚苯乙烯凝胶Bio-Beads S-X型的数据181

十二、制备级Superdex凝胶过滤介质的数据181

十三、聚乙烯醇型凝胶Toyopearl的数据182

十四、各种凝胶所允许的最大操作压182

第二节 凝胶过滤用标准蛋白183

一、凝胶过滤用低相对分子质量标准的组成183

三、凝胶过滤用相对分子质量标准品184

二、凝胶过滤用高相对分子质量标准的组成184

第三节 干燥剂、致冷剂、浓缩剂及硅化剂185

一、干燥剂185

二、致冷剂186

三、浓缩剂189

四、硅烷化剂190

第四节 生物化学中某些重要化合物的Mr及pK值192

一、长度单位194

第五节 一些常用单位194

二、体积单位195

三、质量单位195

四、摩尔与摩尔浓度表示法195

五、十进位数量词头及符号196

附录 实验课教学大纲197

一、本课程的目的意义197

二、本课程的基本要求197

三、实验教学大纲199

主要参考书目204