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第一部分 分子生物学实验基础知识2

第1章 分子生物学实验室规则和安全2

1.1 实验室一般规则2

1.2 实验室常识2

1.3 实验室安全基础知识3

1.4 实验室合理设计和布局4

1.5 实验室急救4

1.6 废弃物、放射性物质及有毒物质的处理5

第2章 分子生物学实验常用仪器设备及其操作7

2.1 分子生物学实验常用仪器设备7

2.2 冷冻离心机8

2.3 电泳仪9

2.4 分析天平10

2.5 分光光度计10

2.6 数字式酸度计11

2.7 PCR仪12

2.8 凝胶成像系统13

2.9 摇床13

2.10 水的净化装置14

2.11 消毒设备15

第3章 细菌培养常用培养基和抗生素溶液的配制方法17

3.1 常用培养基的配制方法17

3.2 常用抗生素溶液的配制方法18

第4章 GenBank数据库简介20

4.1 概述20

4.2 GenBank的建立与发展20

4.3 GenBank的检索22

4.4 GenBank数据库结构23

第二部分 分子生物学常用实验技术32

第5章 核酸的制备32

5.1 核酸制备的原理与方法32

5.2 质粒的生物学特性35

5.3 常用克隆载体的特征37

实验1 真核生物基因组DNA提取38

实验2 总RNA的提取及鉴定40

实验3 质粒DNA的微量提取和鉴定44

第6章 DNA的酶切和凝胶电泳47

6.1 限制性核酸内切酶的特性及应用47

6.2 琼脂糖凝胶电泳49

6.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳51

实验4 DNA的限制性核酸内切酶酶切及凝胶电泳53

第7章 DNA转化57

7.1 感受态细胞的制备57

7.2 转化57

实验5 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化59

第8章 DNA重组的基本流程和方法64

8.1 目的基因的获取64

8.2 DNA分子的体外重组65

8.3 DNA重组体的导入66

8.4 受体细胞的筛选68

8.5 基因表达69

实验6 DNA片段的黏性末端连接法70

实验7 DNA片段的黏-平端连接法71

实验8 重组子的筛选与鉴定73

第9章 聚合酶链式反应技术76

9.1 常规PCR技术的原理及操作76

9.2 引物设计原则及合成80

9.3 PCR产物的纯化与鉴定81

实验9 PCR扩增特异性DNA片段及扩增产物的纯化与鉴定83

第10章 核酸杂交技术86

10.1 几种核酸探针标记方法86

10.2 核酸探针制备和纯化技术89

实验10 核酸探针制备和纯化97

实验11 菌落原位杂交法99

第三部分 分子生物学综合性、研究性实验104

第11章 外源基因的表达104

11.1 外源基因在原核生物中的表达104

11.2 外源基因在酵母细胞中的表达111

实验12 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达116

实验13 SDS-PAGE电泳检测表达的外源蛋白117

实验14 脂肪酶基因在枯草杆菌中表达及表达产物的研究119

实验15 外源基因在酵母细胞中表达及表达产物的研究121

第12章 利用分子生物学技术进行细菌的种属鉴定123

12.1 微生物分类鉴定方法的发展123

12.2 16S rDNA分类鉴定技术的原理124

实验16 利用16S rDNA序列分析技术进行细菌种属的鉴定125

第13章 基因表达差异的分析130

13.1 差减杂交130

13.2 mRNA差异显示技术131

13.3 cDNA示差分析131

13.4 差减抑制杂交方法132

实验17 半定量RT-PCR技术检测基因的表达差异133

附录138

附录A 常用单位及换算方法138

附录B 常用核酸、蛋白质换算数据138

附录C 核酸的单位及有关数据139

附录D 常见核酸分子的长度和相对分子质量139

附录E 色素在聚丙烯酰胺凝胶中的移动参数140

参考文献141