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1 概述1

1.1 流式细胞术基本概念2

1.2 分析型流式细胞仪介绍5

1.3 分选型流式细胞仪介绍9

参考文献13

2 流式细胞仪的原理14

2.1 液流系统15

2.2 光路系统18

2.3 检测分析系统28

2.4 分选系统32

参考文献37

3 流式图39

3.1 流式通道40

3.2 流式直方图41

3.3 流式散点图45

3.4 流式等高线图48

参考文献50

4 流式细胞术的基本操作与技巧51

4.1 样品制备52

4.1.1 独立细胞样品制备52

4.1.2 免疫器官样品制备54

4.1.3 实体脏器样品制备55

4.2 荧光素偶联抗体及其标记方法56

4.2.1 荧光素57

4.2.2 荧光素偶联抗体61

4.2.3 样品封闭62

4.2.4 荧光素偶联抗体标记64

4.3 光电倍增管电压设定66

4.4 对照的设置71

4.4.1 阴性对照的设置71

4.4.2 FMO对照73

4.4.3 阳性对照的设置74

4.5 补偿调节75

4.5.1 补偿调节的原理75

4.5.2 调节补偿的具体方法76

4.5.3 三色和四色分析补偿调节方法79

4.5.4 影响补偿大小的因素82

4.6 阈值设定84

4.7 流式分析中的死细胞问题85

4.7.1 减少样品中死细胞比例的方法86

4.7.2 流式分析时区分死细胞和活细胞的方法86

4.8 流式分选模式选择91

4.8.1 纯化模式92

4.8.2 富集模式93

4.8.3 单细胞模式93

4.9 上样速度控制94

4.9.1 流式分析速度控制95

4.9.2 流式分选速度控制95

4.10 分选设门基本原则97

4.11 流式分选基本步骤99

参考文献100

5 流式分析术的应用102

5.1 细胞群比例测定103

5.2 表型测定109

5.3 检测细胞因子115

5.3.1 胞内染色法检测细胞因子116

5.3.2 胞内染色法与ELISA法比较123

5.3.3 CBA法测定细胞因子125

5.3.4 CBA法与ELISA法比较127

5.4 检测细胞增殖128

5.4.1 相对计数法129

5.4.2 示踪染料标记法133

5.4.3 BrdU和EdU掺入法138

5.4.4 其他方法141

5.5 检测细胞凋亡142

5.5.1 annexin V/PI双染色法142

5.5.2 SYTO/PI双染色法145

5.5.3 细胞DNA含量分析法检测细胞凋亡146

5.5.4 线粒体损伤检测法147

5.5.5 活化的caspase-3检测法151

5.5.6 荧光素偶联的caspase抑制剂（FLICA）标记法151

5.5.7 甲酰胺诱导ssDNA单抗检测法152

5.5.8 TUNEL法153

5.6 检测细胞周期154

5.6.1 非特异性核酸荧光染料标记法154

5.6.2 特异性细胞周期调节蛋白检测法159

5.7 检测细胞杀伤能力160

5.8 检测细胞吞噬功能166

5.9 检测胞内活化的激酶168

5.10 检测细胞自噬169

5.11 检测基因表达171

5.11.1 GFP报告基因系统171

5.11.2 lacZ报告基因系统172

5.11.3 β-内酰胺酶报告基因系统173

5.11.4 新型膜结合型报告分子系统174

5.12 检测细胞内两种蛋白质的直接结合174

5.12.1 荧光共振能量转移结合流式细胞术检测两种蛋白质的直接结合174

5.12.2 双分子荧光互补结合流式细胞术检测两种蛋白质的直接结合176

5.13 微生物学中的应用177

5.13.1 荧光素偶联抗体直接检测法178

5.13.2 抗体结合人工荧光微球直接检测法179

5.13.3 微生物活性流式检测179

5.13.4 人工微球荧光免疫试验检测抗体180

5.13.5 荧光原位杂交流式检测法181

5.13.6 PCR免疫微珠法182

5.13.7 原位PCR杂交流式检测法182

5.14 检测钙相关分子183

5.14.1 检测细胞内游离的钙离子水平183

5.14.2 检测钙蛋白酶活性184

5.14.3 检测细胞膜钙泵活性186

5.15 表观遗传学中的应用188

5.15.1 ChIP-on-beads法189

5.15.2 检测细胞水平组蛋白修饰情况191

5.16 检测缝隙连接介导的细胞通讯191

5.17 检测细胞内pH值和钠氢转运体活性194

5.17.1 检测细胞内pH值194

5.15.2 检测钠氢转运体活性196

5.18 其他应用197

5.18.1 检测活性氧簇197

5.18.2 检测细胞内游离的锌离子水平198

5.18.3 检测端粒长度199

5.18.4 检测脂筏结合蛋白201

引文目录203

参考文献207

6 流式分选术的应用211

6.1 流式分选与磁性分选212

6.2 流式分选独立群体细胞214

6.3 流式分选非独立细胞群体216

6.4 流式分选低比例细胞群体220

6.4.1 强势细胞群的辐射影响220

6.4.2 流式分选结合磁性分选221

6.4.3 二次分选法222

6.5 流式分选干细胞224

6.5.1 流式分选造血干细胞224

6.5.2 流式分选侧群干细胞229

6.5.3 流式分选间充质干细胞231

6.5.4 流式分选肿瘤干细胞232

参考文献235