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第一章 脑血管病概述1

一、脑血管病的概念和流行病学1

二、脑血管病分类2

三、脑血液循环调节及病理生理2

四、脑的血管4

五、脑血管病的病因6

六、脑血管病的危险因素与预防7

第二章 急性脑缺血模型15

第一节 局灶性脑缺血模型16

一、大鼠局灶性脑缺血模型16

二、小鼠局灶性脑缺血模型33

三、家兔局灶性脑缺血模型35

第二节 全脑缺血模型42

一、大鼠全脑缺血模型42

二、小鼠全脑缺血模型46

三、家兔全脑缺血模型52

第三节 TIA模型54

一、TIA模型的分类55

二、TIA模型的评价标准57

三、常用TIA模型的制作57

第四节 脑缺血模型神经功能损伤的评价方法60

一、运动、平衡功能评价60

二、感觉功能评分法64

第五节 脑梗死体积的评价方法73

一、TTC染色测定脑梗死体积73

二、苏木精-伊红染色法测定脑梗死体积74

三、焦油紫染色77

四、磁共振成像78

第三章 慢性脑缺血模型83

第一节 慢性脑缺血模型的制作方法84

一、大鼠慢性脑缺血实验动物模型84

二、小鼠慢性脑缺血实验动物模型97

三、其他动物99

第二节 神经功能评价100

一、总体状态100

二、记忆功能评定100

第三节 神经损伤的评价107

一、监测脑血流107

二、神经电生理改变108

三、P300的测定110

四、眩晕潜伏期测定111

五、苏木精-伊红染色111

第四章 脑出血模型114

第一节 脑出血模型的制作方法114

一、实验动物的选择及出血部位选择114

二、大鼠脑出血模型的制作115

三、兔脑出血模型122

四、脑出血模型制作技巧123

五、脑出血模型制作的有关问题124

第二节 脑出血模型的行为学评价127

一、Bederson评分128

二、平衡木行走试验128

三、肌力测验128

四、前肢放置检测129

第三节 血肿的评定及组织学观察129

一、头颅磁共振扫描129

二、CT灌注成像130

三、组织学观察130

第五章 蛛网膜下隙出血模型132

第一节 SAH动物模型的制作方法132

一、脑池注血法132

二、颅内动脉穿刺法138

三、动脉周围置血法141

第二节 神经功能评价方法142

一、平衡木实验142

二、转棒实验143

三、抓握牵引实验143

四、走横木实验144

五、Bederson评分法145

六、Kaoutzanis 11分评分法146

七、Garcia 18分评分法147

八、Katz 100分评分法147

九、Morris水迷宫实验148

十、Endo4级评价法149

第三节 神经损伤的评价方法150

一、大体病理观察150

二、病理学检查150

三、脑含水量测定151

四、脑血流量的测定151

五、常规生理参数的监测152

六、血-脑屏障通透生的测定153

七、大脑动脉血管截面积测量154

八、磁共振成像扫描155

九、经颅多普勒156

十、数字减影血管造影157

十一、三维CT血管造影158

第六章 小动物脑的整体实验方法160

第一节 激光多普勒检测脑血流160

一、激光多普勒检测局部脑血流161

二、激光多普勒检测特定位点的脑血流162

第二节 高速摄像检测细静脉管径及红细胞流速动态观察162

大鼠和小鼠软脑膜细静脉管径和红细胞流速动态观察163

第三节 活体观察软脑膜细静脉血栓形成的动态变化165

一、光化学刺激诱导小鼠脑细静脉血栓形成165

二、ADP表面滴加诱导小鼠脑细静脉血栓的形成167

第四节 脑血管新生的观察168

一、可视化颅窗法观察脑血管形态变化169

二、同步辐射X射线检测小动物脑微血管169

第五节 活体观察脑血管通透性的动态变化174

一、伊文思蓝法检测血-脑屏障通透性174

二、FITC荧光标记的白蛋白在大鼠软脑膜细静脉漏出动态的连续观察176

第六节 活体观察在微脑血管白细胞滚动及黏附的动态变化178

第七章 标本的留取方法180

第一节 血液的采集180

一、眼眶采血法181

二、尾部采血法182

三、心脏采血法183

四、大动脉血管采血法184

五、静脉采血法186

六、采血时的注意事项186

第二节 脑脊液采集方法187

一、大小鼠脑脊液的采集187

二、家兔脑脊液的采集188

第三节 外周血免疫细胞的分离189

一、外周血中中生粒细胞、淋巴细胞、单核189

细胞的分离189

二、外周血中血小板的分离192

第四节 脑组织单细胞悬液的制备方法193

一、脑组织单细胞悬液的制备方法193

二、流式细胞术急性分离小鼠小胶质细胞194

第五节 脑组织石蜡切片的制备195

第六节 脑组织冰冻切片的制备199

第七节 脑组织电镜标本的制备203

第八节 脑组织蛋白的提取209

一、脑组织取材209

二、总蛋白提取210

三、脑组织的膜蛋白、浆蛋白、核蛋白的提取214

第九节 脑组织微血管的分离215

第十节 脑组织线粒体的分离216

一、二次蔗糖密度梯度离心纯化线粒体217

二、试剂盒方法219

第八章 脑血管病研究的在体实验方法221

第一节 苏木精-伊红（HE）染色221

一、石蜡切片的HE染色222

二、冰冻切片的HE染色223

第二节 尼氏染色观察神经元223

一、焦油紫染色（石蜡切片）224

二、甲苯胺蓝染色（石蜡切片）225

三、改良后的甲苯胺蓝染色方法（石蜡切片）225

四、硫堇染色（石蜡切片）226

第三节 镀银法染色观察神经元纤维227

一、Golgi-COX染色（可用石蜡或冰冻切片）228

二、Cajal法神经原纤维镀银染色（可用石蜡或冰冻切片）230

第四节 神经胶质细胞特异染色231

一、Holzer神经胶质纤维染色方法（石蜡切片）232

二、Penfield胶质细胞染色（冰冻切片）233

三、改良的Holzer神经胶质纤维染色方法234

第五节 神经髓鞘的特异染色235

一、Luxol Fast Blue染色（冰冻切片）235

二、多内给（Donaggio）法236

三、玛气（Marchi）法237

第六节 脑组织的TUNEL染色237

一、石蜡切片的TUNEL荧光染色238

二、冰冻切片的TUNEL荧光染色239

第七节 脑组织的细胞增殖BrdU染色240

第八节 脑组织的过氧化物DHE染色242

一、利用荧光探针直接测定脑组织冰冻切片活生氧的形成243

二、利用荧光探针直接测定线粒体活性氧的形成244

第九节 脑内的淀粉样物质的染色245

一、甲基紫法（石蜡切片）245

二、刚果红甲醇法（石蜡切片）246

三、改良刚果红甲醇法（石蜡切片）247

第十节 免疫组织化学及免疫荧光化学248

一、免疫组化（石蜡切片）248

二、免疫组化（冰冻切片）250

三、免疫荧光（石蜡切片）252

四、免疫荧光（冰冻切片）253

第十一节 酶联免疫吸附剂测定ELISA253

第十二节 免疫印迹255

第十三节 免疫共沉淀259

第十四节 DNA的提取及PCR鉴定转基因小鼠基因表型263

第十五节 RNA的提取及Rea1-time PCR265

第十六节 DNA与蛋白质相互作用分析270

第十七节 脑组织切片的原位杂交273

第九章 脑血管病研究的离体实验方法277

第一节 细胞培养室的基本条件及设备277

一、细胞培养室布局规划277

二、细胞培养基本设备279

第二节 无菌操作281

一、细胞培养室及相关设备的常规灭菌消毒281

二、常用器皿清洗281

三、各类实验用品的无菌处理283

四、基本无菌操作技术及要求285

五、常见污染种类及解决办法286

第三节 常用液体配置287

一、培养用液288

二、培养基291

三、抗生素292

四、抗有丝分裂剂292

第四节 细胞培养基本技术293

一、原代培养293

二、神经组织常见细胞系293

三、细胞传代296

四、细胞生长状态的观察297

五、细胞冻存、复苏与运输297

第五节 正常神经组织常见类型细胞的原代培养299

一、神经元299

二、脑微血管内皮细胞302

三、小胶质细胞305

四、星形胶质细胞308

五、少突胶质细胞310

六、神经干细胞312

七、脑微血管内皮细胞与星形胶质细胞共培养建立体外血-脑屏障314

第六节 脑血管病常见离体细胞模型制作316

一、氧糖剥夺模型316

二、凝血酶模拟急性脑出血模型318

三、过氧化氢氧化应激损伤模型320

四、兴奋性氨基酸损伤模型320

五、炎症损伤模型321

第七节 常用细胞分析检测322

一、细胞活性实验322

二、细胞凋亡实验326

三、细胞迁移实验331

四、细胞增殖实验332

五、细胞周期实验333

六、细胞形态学实验335

第八节 脑血管病常用的电生理技术338

一、膜片钳记录标本的制备338

二、膜片钳电生理记录345

第十章 非人灵长类动物脑血管病模型352

第一节 动物模型的制作352

一、基本准备和麻醉352

二、MCAO（middle cerebral artery occlusion）模型制作和术后护理360

三、自体抗凝血制备脑出血模型362

四、蛛网膜下隙出血模型362

五、磁共振扫描363

六、组织学检测364

第二节 非人灵长类动物模型的研究现状和评价364

一、伦理问题365

二、非人灵长类动物脑卒中模型的设计365

第十一章 脑血管病转化医学研究的现状371