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第一篇 生物化学实验1

实验一 植物细胞蛋白质的提取1

实验二 牛乳中酪蛋白的制备及等电点的测定3

实验三 大豆蛋白的提取及含量测定5

实验四 双缩脲法（Biuret法）测定蛋白质含量7

实验五Folin-酚法（Lowry法）测定蛋白质含量9

实验六 考马斯亮蓝染色法（Bradford法）测定蛋白质含量12

实验七 双辛丹宁法（BCA）测定蛋白质含量14

实验八 紫外（UV）吸收法测定蛋白质含量16

实验九 微量凯氏（Kjeldahl）定氮法测定蛋白质含量18

实验十 凝胶过滤层析法测定蛋白质相对分子质量20

实验十一SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量23

实验十二 盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白26

实验十三 滤纸层析及薄层层析法分离与鉴定氨基酸28

一、氨基酸的纸层析28

二、氨基酸的薄层层析29

实验十四 离子交换柱层析法分离氨基酸31

实验十五 定磷法定量测定核酸33

实验十六 紫外（UV）吸收法定量测定核酸35

实验十七 酵母RNA提取与地衣酚测定法37

实验十八 发酵过程中无机磷的利用40

实验十九 黄连素的提取42

实验二十 黄连素的紫外光谱分析44

实验二十一 肝糖原的提取及鉴定46

实验二十二 血糖的定量测定48

实验二十三Somogyi-Nelson比色法测定还原糖含量50

实验二十四 硫酸一酚法测定糖含量52

实验二十五 淀粉的测定54

实验二十六 薄层层析法分离鉴定糖类物质56

实验二十七3，5-二硝基水杨酸法测定还原糖和总糖58

实验二十八 糖的呈色反应和还原糖的检验61

实验二十九 糖酵解中间产物的鉴定65

实验三十 胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响——邻甲苯胺法测定血液葡萄糖浓度67

实验三十一 植物总黄酮的提纯与鉴定70

实验三十二2，6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C72

实验三十三 粗脂肪的提取和索氏（Soxhlet）提取法定量测定粗脂肪含量74

实验三十四 脂肪碘值的测定76

实验三十五 血清三酰甘油的测定78

实验三十六 胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇80

实验三十七 二乙酰一肟法测定血清尿素82

实验三十八 酶促反应进程曲线的制作和初速度的测定84

实验三十九 酸性磷酸酯酶的提取与Folin-酚法测定其活力86

实验四十 双倒数作图法测定碱性磷酸酶米氏常数89

实验四十一King氏法测定血清谷丙转氨酶（SGPT）活性92

实验四十二 酶联免疫吸附试验（ELISA）检测人体血清中乙型肝炎病毒表面抗体94

实验四十三 激活剂、抑制剂、温度、pH对酶活性的影响98

实验四十四 细菌血栓溶解酶活性测定100

实验四十五 过氧化氢酶Km值的测定102

实验四十六 用正交法测定几种因素对酶活力的影响104

实验四十七 酯酶的分离、纯化与活性测定108

实验四十八 脲酶Km值的简易测定111

第二篇 分子生物学实验114

实验一 真核生物细胞染色体DNA的提取及含量测定114

实验二 一步法提取动物肝脏组织总RNA117

实验三 植物总RNA的提取119

实验四 目的基因PCR扩增及产物回收122

实验五 碱裂解法微量制备质粒DNA125

实验六 质粒DNA的大量提取和纯化127

实验七 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备129

实验八 重组质粒的连接131

实验九 重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞及筛选、鉴定133

实验十 重组质粒DNA的酶切135

实验十一DNA酶切片段的分离与纯化137

实验十二 重组表达质粒的原核表达139

实验十三DNA印迹杂交142

实验十四 凝胶电泳阻滞实验146

实验十五 动物组织总蛋白的提取148

实验十六SDS-PAGE与蛋白质印迹150

实验十七 真核生物mRNA的分离纯化153

实验十八cDNA文库的构建157

实验十九 利用RNAi技术鉴定基因功能164

实验二十 酵母双杂交系统测定蛋白质相互作用166

实验二十一GST融合蛋白沉降（GST Pull-Down）技术169

附录171

一、实验室主要仪器使用操作规程与注意事项171

二、常用缓冲溶液的配制178