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第一章　细胞培养的基本技术1

第一节　细胞培养的基础1

一、细胞培养的目的与用途1

二、细胞培养室的设置、设备2

第二节　细胞培养室3

一、无菌室3

二、准备室3

第三节　无菌操作的要求3

一、无菌室及超净工作台的灭菌3

二、实验人员的消毒4

三、无菌操作方式4

四、器械的清洗和消毒4

第四节　细胞培养用液的配制与消毒6

一、器材和试剂6

二、水的制备6

三、平衡盐溶液6

四、胰蛋白酶的配制与消毒7

五、干粉型培养基的配制与消毒7

六、青链霉素的配制与消毒10

七、血清10

第二章　细胞培养技术13

第一节　细胞培养条件13

一、细胞培养温度13

二、合适的气体环境13

第二节　细胞培养无菌操作基本技术14

一、无菌操作技术分为三个部分14

二、工作人员应注意自身的安全14

三、定期检查下列项目14

第三节　培养细胞生长过程15

一、潜伏期15

二、指数增生期15

三、停滞期16

四、培养细胞基本形态16

第四节　培养的保持17

第五节　体外培养细胞的种类和命名17

一、初代培养18

二、细胞系18

三、克隆细胞株18

四、二倍体细胞18

五、遗传缺陷细胞19

六、肿瘤细胞系或株19

第六节　建立细胞系（或株）的要求19

一、组织来源20

二、细胞生物学检测20

三、培养条件和方法20

第七节　若干细胞建株的要点及基本过程20

一、肿瘤细胞培养技术要点20

二、人类淋巴母细胞建株方法21

第八节 已建立细胞系或株的鉴定、管理和使用22

第三章　细胞培养的一般过程24

第一节　准备工作24

一、准备工作24

二、取材24

第二节　培养及冻存25

一、培养25

二、冻存及复苏25

第四章　培养细胞的细胞生物学27

第一节　体内、外细胞的差异和分化27

一、差异27

二、分化27

第二节　建立细胞系28

一、细胞生物学检测28

二、培养条件和方法28

三、动物细胞培养28

四、原代培养29

五、细胞的复苏31

六、传代细胞培养31

七、细胞的冻存32

八、培养细胞的观察33

九、细胞悬液中细胞数目的测定33

十、细胞活力的检测34

第五章 细胞RNA的制备与分析36

第一节　RNA的制备36

一、从组织培养细胞中提取细胞质RNA38

二、异硫氰酸胍法制备总RNA39

三、TRIzol试剂提取细胞总RNA方法40

四、培养细胞总RNA的快速提取41

五、组织RNA的制备42

六、氯化铯（CsCl）法纯化并从培养细胞中提取RNA42

第二节　RNA的分析44

一、Northern Blot杂交44

二、RNA的狭线杂交47

第六章　聚合酶链反应技术49

第一节　PCR的原理与基本操作50

一、PCR的原理50

二、基本操作50

第二节　PCR反应体系中的各种组分52

一、引物52

二、DNA聚合酶55

三、PCR反应缓冲液55

四、dNTPs55

第三节　PCR反应条件的优化56

一、MgCl2浓度56

二、起始情况56

三、热循环参数56

四、引物选择57

五、模板58

六、PCR产物积累规律58

七、预防假阳性结果58

第四节　PCR反应模板的制备60

一、细菌DNA的制备60

二、全血标本DNA制备61

三、从白细胞中制备DNA62

四、临床拭子标本DNA的提取66

五、固定和包埋的组织标本DNA提取67

六、由微量及特殊标本中制备染色体68

七、RNA标本的制备69

第五节　RT-PCR70

一、基本步骤70

二、简化步骤72

三、影响因素72

第六节　单侧（锚式）PCR73

一、扩增已知序列的下游片段73

二、扩增已知序列的上游片段74

第七章　免疫沉淀法和Western印迹试验78

第一节　抗原制备及免疫沉淀78

一、抗原制备78

二、免疫沉淀79

第二节　SDS-PAGE电泳及免疫印迹试验80

一、SDS-PAGE电泳80

二、免疫印迹试验83

第八章　DNA的限制性内切酶酶切技术88

第一节　限制性内切酶的特性和反应条件88

一、限制性内切酶的来源88

二、限制性内切酶的命名88

三、分类89

四、限制酶的特性89

五、酶活力单位的定义及酶的贮存89

六、限制酶的反应条件90

第二节　限制性内切酶的应用方法90

一、小量酶切反应91

二、大量酶切反应91

三、双酶切反应91

四、酶切产物的鉴定92

第九章　重组DNA基本方法93

第一节　载体的制备94

一、细菌的培养95

二、感受细菌的制备及质粒DNA的转化96

三、质粒提取97

第十章　细胞凋亡的信号传导101

第一节　细胞凋亡信号传导的一般特征101

一、概述101

二、细胞凋亡信号传导系统与其诱导因素的相互关系102

第二节　调控细胞凋亡的传统信号途径103

一、G结合蛋白信号途径与细胞凋亡103

二、酶蛋白信号途径与细胞凋亡108

第三节　调控细胞凋亡的死亡信号途径112

一、死亡因子及其受体113

二、FasL/TNF介导的信号传导途径114

三、两型TNF和两种TNFR的相互关系122

第四节　参与细胞凋亡调控的其他信号传导系统123

一、T细胞受体信号传导途径与细胞凋亡123

二、黏附分子与细胞凋亡125

三、活性氧与细胞凋亡132

四、细胞色素C与细胞凋亡134

五、线粒体与细胞凋亡135

六、细胞周期蛋白依赖性激酶与细胞凋亡138

七、细胞内pH值与细胞凋亡138

第五节　细胞凋亡研究的临床应用导论142

一、细胞凋亡与坏死143

二、细胞凋亡与临床联系导论145

三、细胞凋亡与疾病148

四、细胞凋亡的调节与疾病的治疗160

第六节　细胞凋亡与衰老162

一、体内有丝分裂细胞的衰老与凋亡163

二、衰老个体中有丝分裂后细胞的凋亡165

三、衰老个体中肝细胞的凋亡166

四、衰老个体中干细胞的凋亡166

五、衰老相关疾病中的细胞凋亡166

六、细胞凋亡与老年痴呆167

七、细胞凋亡与自由基168

八、细胞凋亡与衰老相关的调控基因169

第七节　细胞凋亡与口腔颌面部疾病173

一、细胞凋亡与牙龈炎和牙周病174

二、细胞凋亡与口腔黏膜疾病176

三、细胞凋亡与舍格林综合征179

四、细胞凋亡与颞下颌关节病180

五、细胞凋亡与涎腺疾病180

六、细胞凋亡与口腔颌面部肿瘤181

七、细胞凋亡与造釉细胞瘤181

第十一章　细胞凋亡与肿瘤189

第一节　细胞凋亡在肿瘤细胞中的存在形式189

第二节　细胞凋亡与肿瘤的发生190

一、Bcl-2家族在细胞凋亡与肿瘤发生中的作用190

二、c-myc在细胞凋亡与肿瘤发生中的作用192

三、p53在细胞凋亡与肿瘤发生中的作用192

四、Rb基因在细胞凋亡与肿瘤发生中的作用194

第三节　细胞凋亡与肿瘤耐药195

一、突变p53与肿瘤细胞耐药197

二、Bcl—2基因的过度表达与肿瘤细胞耐药的关系198

三、Ras基因突变与肿瘤细胞耐药的关系198

四、PKC激活与肿瘤细胞耐药199

五、DNA拓扑异构酶与肿瘤细胞耐药200

第四节　诱导细胞凋亡—肿瘤治疗的新策略202

一、放射线诱导细胞凋亡202

二、抗癌药物诱导肿瘤细胞凋亡206

三、激素应用或撤退诱导肿瘤细胞凋亡210

四、基因及其产物诱导肿瘤细胞凋亡214

五、免疫细胞、单克隆抗体及细胞因子诱导肿瘤细胞凋亡221

六、中药诱导肿瘤细胞凋亡227

七、高浓度氧、高热诱导肿瘤细胞凋亡230

八、光动力治疗诱导肿瘤细胞凋亡的分子作用机制232

九、电化学疗法诱导肿瘤细胞凋亡236

十、肿瘤细胞凋亡的诱导阈值241

第十二章　免疫组织化学244

第一节　免疫组织化学概论244

一、免疫组织化学的基本知识244

二、免疫组织化学的分类251

三、免疫组织化学标记物252

第二节　免疫组织化学的基本技术253

一、组织和细胞标本的制备253

二、免疫组织化学染色过程中的基本技术256

第三节　免疫组织化学操作规程260

一、仪器设备260

二、试剂260

三、操作流程261

四、免疫组织化学流程举例262

五、免疫组织化学实验过程中的要点和技巧263

第四节　免疫组织化学的应用265

一、免疫组织化学检验项目265

二、免疫组织化学应用的范围270

三、免疫组织化学技术进展276

参考文献279